光片荧光显微镜技术已经彻底改变了生物显微镜技术，使生物样品的低光毒性长期3D成像成为可能。
光片荧光显微镜(LSFM)简介
光片荧光显微镜技术已经彻底改变了生物显微镜技术，使生物样品的低光毒性长期3D成像成为可能。
光片荧光显微镜(LSFM)是一种简单但功能强大的成像技术，可以对活体标本进行快速且无光毒性的3D检查。大多数LSFM实现依赖于荧光报告的样品标记来成像目标生物结构。这提供了荧光显微镜的特异性优势，使其在各种生物实验中取得成功。在LSFM中，通过样品的激光光片介导荧光激发。在其通过组织的传播过程中，部分激光向检测摄像机散射，这些光通常被特定的滤光片阻挡和丢弃。然而，这种散射光可以携带有关样品结构和组成的有价值的信息。当散射是非弹性的，例如拉曼散射时，得到的光谱可以提供三维的样品化学成分信息。另一方面，当散射是弹性时，它揭示了样品在不同空间尺度上的结构信息:远小于(瑞利散射)，与(米氏散射)相当，甚至远大于(几何散射)光的波长。这是由于方法协议的变化。12个折射率中的2个，即光散射的来源，是局部分子密度的度量，因此也是生物样品结构的度量。除了光学相干断层扫描(OCT)技术外，样品的弹性散射很少用作生物成像的对比源。OCT依靠样品的红外光后向散射产生组织的横截面图像。在分辨率和穿透深度方面，OCT介于超声成像和光学显微镜之间，并且由于其通用性已成为医学许多领域的重要工具。然而，当相干光的弹性散射用于OCT或其他成像方式时，由于组织和其他细胞复合物典型的非均匀折射率，在穿过样品时产生复杂的干涉场。由于其颗粒状外观，该领域被称为“散斑图案”，对于成像应用，它通常被认为是有害的，因为它叠加了感兴趣的特征。在某些应用中，当应用波前整形时，可以利用散斑图来克服不透明样品中的散射和扩散，但在复杂性和一般适用性方面并非没有限制。
因此，散斑使得弹性散射成为光片成像对比度来源的不良候选，因为它引入了不希望的局部强度调制，与样品自身特征产生的强度对比度完全无法区分。尽管如此，薄片弹性散射显微镜已经用于植物根系表型分析，其中图像质量被证明取决于安装基板和样品的浊度。为了减少衬底的诱导背景和散斑噪声，该技术进一步更新为包括偏振滤波和轴向扫描，但代价是降低了显微镜的轴向分辨率。另一种基于弹性散射的不同实现使用低相干光片照明，而不是轴向扫描，以减少斑点。在这种情况下，我们使用一堆遮光片来产生一组以不同角度传播的光片，这些光片被加在一起以抵消斑点。该技术被应用于增强小鼠大脑未染色的形态学神经元结构的可视化。
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