快速准确地识别流感病毒对于预防未来大流形病爆发非常重要。韩国Taejoon Kang教授使用表面增强拉曼散射（SERS）抗体探针开发
了一种简便灵敏的流感病毒检测方法。SERS抗体探针可以通过混合Au纳米颗粒、金结合肽-蛋白G和抗体简易制备，无需复杂的化学或
生物反应。它们还保留了抗体与流感A/CA/07/2009 (pH1N1)相互作用的最佳构象，使我们能够灵敏地、有选择性地检测pH1N1.这个
方法提供的检测限为4.1 ×103TCID/ml,对pH1N1具有高度选择性。
金属胶体纳米颗粒由于稳定性高、大小可调、光学性能独特和生物相容性被广泛用于超灵敏检测探针，尤其在SERS中，分子的拉曼信
号增加108。基于SERS的实验有单分子水平灵敏度、分子特异性和减少光漂白的优势。许多基于纳米颗粒的金属探针被用来检
DNA,RNA，蛋白质，病原体，癌细胞和化学物质，然而很少有报道使用SERS探针直接检测病毒。
本文报道了通过SERS抗体探针简便灵敏地检测流感病毒。通过免疫反应将流感A/CA/07/2009 (pH1N1)捕获到基底上，然后应用SERS
抗体探针。在探针Ag增强下，通过SERS检测到了低浓度的pH1N1,并且将pH1N1和其他类型流感病毒区分开来。这个方法有明显的优
势。首先，SERS抗体探针可以通过混合Au纳米颗粒、金结合肽-蛋白G和抗体制备，不需要复杂的化学或生物反应。第二，蛋白质-G抗
体保留了与流感A/CA/07/2009 (pH1N1)相互作用的最优构象，因此和随意标记的抗体相比可以有效检测。第三，通过Ag增强和SERS
测试可以灵敏和定量检测pH1N1。
图1 SERS抗体探针检测流感病毒示意图
使用 SERS 抗体探针的流感病毒检测方法如图 1 所示。捕获底物是通过将蛋白 G 和羧化玻璃底物通过酰胺键偶联，然后用抗 pH1N1
的多克隆抗体处理来制备的。 BSA 用于防止非特异性结合。 为了检测 pH1N1，将含有 pH1N1 的溶液滴在捕获基底上，并应用
SERS 抗体探针，然后使用Ag增强剂溶液增强探针。只有在 pH1N1 存在的情况下，SERS 抗体探针才能被下拉到基板上，并且在 Ag
增强后获得强烈的 SERS 信号。
图2(A) 使用 SERS 抗体探针的在不同浓度（空白、103、104、105、106 和 107 TCID/mL）下的流感病毒检测结果 (B) 1643 cm -1 的 SERS 强度与流感病毒浓度的关系图。 蓝线显示线性拟合线。 数据代表十次测量的平均值加标准偏差。
本文研究了来自捕获基底上的探针的 pH1N1 浓度依赖性 SERS 信号。 pH1N1溶液按1/10系列稀释制备，制备空白溶液作为对照。
如图 2A 所示，SERS 信号随着 pH1N1 浓度的增加而增强。通过绘制 1643 cm- 1 带的强度作为 pH1N1 浓度的函数来进一步分析该
结果（图 2B）。 SERS 信号强度在 103 至 107 TCID/mL 的浓度范围内线性增加，从而实现 pH1N1 的定量检测。估计该方法的检测
限为4.1 ×103 TCID/mL (65 ng mL- 1)。基于 PCR 的检测显示检测限为102 TCID/mL 水平， 与之前报道的免疫测定法相比，本方法
具有更低的检测限和更宽的动态范围。
图3 (A) 分别在 pH1N1、H3N2、H5N2 和 IBV 存在下 RBITC 的 SERS 光谱。
(B) 1643 cm -1 处的 SERS 强度与流感病毒的类型。
(C) 在 (A) 中获得 SERS 光谱基底的 SEM 图像
为了验证该方法的选择性，测试了四种不同类型的流感病毒（pH1N1、H3N2、H5N2 和 IBV）。每种病毒的浓度为 107 TCID/mL。
图3A显示了在四种流感病毒存在下探针的SERS光谱。 仅在存在 pH1N1 时观察到强信号，而在存在 H3N2、H5N2 和 IBV 时观察到
弱信号。 1643 cm-1 条带强度图更清楚地证实了该方法对 pH1N1 的特异性（图 3B）。 图 3C 中的 SEM 图像还表明，许多放大的探
针仅在 pH1N1 存在时才存在。 由于 SERS 抗体探针可以简单地用各种流感病毒特异性抗体进行修改，预计本方法将有助于识别流感
病毒类型。
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