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2019年 Optics Express:傅里叶光场显微镜

发布时间:2022-04-24 14:06:27 浏览量:2637 作者:LY.Young 光学前沿

摘要

光场显微镜 (lifgt-field microscopy, LFM) 同时采集入射光的二维空间和二维角度信息,可以从单个相机帧计算重建样本的完整三维体积。与其它以顺序或扫描方式累积空间信息的荧光成像技术不同,这种四维成像方案有效地从空间尺度(例如视场 (FOV) 和空间分辨率)上减小了体积采集时间,从而使 LFM 成为生物系统高速体积成像的有效工具之一,并具有低光损伤的特点。最新的 LFM 技术已经证明了其能够应用于功能性脑成像,在数十至数百微米的深度保持细胞级空间分辨率,体积采集时间为 10 毫秒级。甚至,该方法最近已被证明用于观察单细胞标本的结构和动力学,具有接近衍射极限的三维空间分辨率、数微米的成像深度(足以覆盖单个细胞的大部分体积),以及毫秒级的采集时间。

正文


2019年 Optics Express:傅里叶光场显微镜


技术背

光场显微镜 (lifgt-field microscopy, LFM) 同时采集入射光的二维空间和二维角度信息,可以从单个相机帧计算重建样本的完整三维体积。与其它以顺序或扫描方式累积空间信息的荧光成像技术不同,这种四维成像方案有效地从空间尺度(例如视场 (FOV) 和空间分辨率)上减小了体积采集时间,从而使 LFM 成为生物系统高速体积成像的有效工具之一,并具有低光损伤的特点。最新的 LFM 技术已经证明了其能够应用于功能性脑成像,在数十至数百微米的深度保持细胞级空间分辨率,体积采集时间为 10 毫秒级。甚至,该方法最近已被证明用于观察单细胞标本的结构和动力学,具有接近衍射极限的三维空间分辨率、数微米的成像深度(足以覆盖单个细胞的大部分体积),以及毫秒级的采集时间。对于传统的 LFM,微透镜阵列 (MLA) 放置在宽视场显微镜的原生像平面 (native image plane, NIP) 上,并且光学信号以欠采样方式记录在 MLA 后焦平面上。波动光学模型的发展,使得严重欠采样的高频空间信息可以通过对点扩散函数(PSF)求解卷积的方法得到一定程度的恢复,从而放宽空间和角度信息之间的权衡要求。


当前不足:

当前有两个主要因素限制了 LFM 的更广泛应用。首先,LFM 的空间信息的采样模式是不均匀的。特别是在NIP附近,信息的冗余导致重建时产生严重的伪影。其次,体积重建采用波动光学模型的 PSF 解卷积。传统 LFM 的 PSF 在横向和轴向维度上都有空间变化,因此用5D 矩阵描述,该矩阵将 3D 物体投影到 2D 相机平面上。这加剧了计算成本,使得重建相当缓慢,并且对于动态或功能数据的快速观察来说是不切实际的。最近虽然提出了傅立叶成像方案,然而,其光学传播模型并不完善,使得应用范围和成像性能都不佳。


文章创新点:

基于此,佐治亚理工学院和埃默里大学的Changliang Guo(第一作者)和Shu Jia(通讯作者)等人为傅里叶光场显微镜构建了完整的光传播、成像和重建模型,并基于此模型构建了傅里叶光场显微镜的通用设计原则。


原理解析:

(1)图像形成。如图1(a)所示,傅里叶透镜(FL)将NIP平面(Iris平面位置)的光场变换到傅里叶域(FD),MLA进一步将此波前(即FD)分割,每一个微透镜传递相应的空间频率(即角度信息)到其后焦平面被相机记录。

(2)光传播模型。首先,使用标量Debye理论将三维物体信息投影到二维NIP面。然后,将二维NIP面的波前用傅里叶变换获得FD面的波前。最后,FD面的波前经过MLA调制后利用菲涅尔传播理论获得相机平面的波前。

(3)重建算法。使用基于Richardson-Lucy迭代机制的解卷积算法求出三维空间信息。



视频1:使用 FLFM 对小鼠肾脏组织进行成像。重建体积:67 µm × 67 µm ×20 µm。


附录:

(1)光场显微镜(上)和傅里叶光场显微镜(下)成像对比


(2)傅里叶光场显微镜设计原则

(3)傅里叶光场显微镜算法流程图

参考文献:Changliang Guo, Wenhao Liu, Xuanwen Hua, Haoyu Li, and Shu Jia, "Fourier light-field microscopy," Opt. Express 27, 25573-25594 (2019)
DOI:https://doi.org/10.1364/OE.27.025573


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