中文：临界照明；英文：critical illumination

照明系统1.临界照明（critical illumination）这是把光源通过照明系统或者聚光镜成像于物面上的照明方法，如下图所示。图中双点划线是从光源到物面再到像面的一对共轭关系，虚线是从光源光阑到物镜孔阑的另一对共轭关系，此时，聚光镜的像方孔径角必须与物镜的物方孔径角相匹配，为此，可以在聚光镜的物方焦面上或附近设置可变光阑。于是照明系统的出瞳正好与物镜的入瞳大致重合。临界照明的缺点是当光源的亮度不均匀或呈现明显的灯丝结构时，将会反映到物面上而影响观察效果。2.科勒照明（Kohler illumination）这是一种把光源像成在物镜入瞳面上的照明方法。它没有临界照明的那种缺点，整个系统如 ...

射。它又分为临界照明和柯勒照明两种。图1.临界照明临界照明：如上图1，临界照明的光源经聚光镜聚焦后成像在待观察样品上，光束狭而强，这是它的优点。但是光源的灯丝像与被检物体的平面重合，这样会造成待观察样品表面的照明不均匀，在有灯丝像的部分照明比较亮；无灯丝像的部分照明就较为暗，不仅会影响成像的质量，更不适合显微照相，这是临界照明的主要缺陷。针对上述问题的解决方法是在光源的前方放置乳白和吸热滤色片，使照明变得较为均匀和避免光源的长时间的照射而损伤被检物体。图2.柯勒照明柯勒照明：柯勒是十九世纪末蔡司厂的工程师，为了纪念他在光学领域的突出贡献,后人把他发明的二次成像叫做柯勒照明。柯勒照明，是用灯丝光 ...

度（图6）。临界照明的使用是由科勒照明在光学上的低效率所决定的，因为科勒照明并没有覆盖整个光源表面或者发射光的全部角度分布。在临界照明中，光源被直接成像到样品平面上，这种方法更为高效，但对光源输出中的任何空间不均匀性也更为敏感。临界落射照明器的作用是均匀化任何空间上的不均匀性，以产生与典型sCMOS相机传感器尺寸（~200mm2）相匹配的高辐照度照明场。Light SourcePower(mW)①Light Guide②Light Guide Cross SectionArea(mm2)NA③Etendue (mm2 sr)④LED500Liquid light guideCircle, 3m ...

中安装专业的临界照明器。Lumencor的CELESTA光引擎很好地满足了这些需求，通过光纤输出耦合到显微镜中，通过高数值孔径的高放大倍数物镜在样品平面上提供1-10W/mm2。图5. 为MERFISH多路单分子成像优化的CELESTA激光光引擎输出光谱。显然，对于那些超出简单光谱分辨能力的高并行荧光标记生物分析，可以通过精心选择荧光团、光学滤光片、精细调节激发照明和智能算法来实现。巧妙的标记策略，如分子条形码，也可以应用于广泛的生物样本，以增强来自高度复杂组织标本的生物分子信息的光谱分辨和空间分布。在此，我们讲述了一种大规模并行单分子成像技术，MERFISH，利用重复标记协议来max化单细胞 ...

中安装专业的临界照明器。Lumencor的CELESTA光引擎很好地满足了这些需求，通过光纤输出耦合到显微镜中，通过高数值孔径的高放大倍数物镜在样品平面上提供1-10W/mm2。图5. 为MERFISH多路单分子成像优化的CELESTA激光光引擎输出光谱。显然，对于那些超出简单光谱分辨能力的高并行荧光标记生物分析，可以通过精心选择荧光团、光学滤光片、精细调节激发照明和智能算法来实现。巧妙的标记策略，如分子条形码，也可以应用于广泛的生物样本，以增强来自高度复杂组织标本的生物分子信息的光谱分辨和空间分布。在此，我们讲述了一种大规模并行单分子成像技术，MERFISH，利用重复标记协议来max化单细胞 ...

性，使得实施临界照明成为可能，在临界照明中，光源在图像平面上聚焦（图7）。LED提供的柯勒照明在样本平面上的照射强度为1-100 mW/mm²，这对于宽场荧光显微镜来说已经足够。然而，柯勒照明相对效率较低，因为它并没有传播光源发出的全部面积或全部角度分布的光。对于像单分子定位显微镜（SMLM）这样的特殊成像技术，需要更高水平的照射强度，大约为10,000 mW/mm²（1 kW/cm²）[6]。这可以通过使用临界落射照明器实现，该照明器将激光光引擎输出的超过50%的输出功率传递到样本平面（图8）。临界落射照明器产生均匀的、高照射强度的照明，其覆盖面积与用于成像的sCMOS相机传感器的面积相匹配 ...